实验服务

实验委托服务
  绿藻公司可以帮助客户完善科研实验,满足客户提高科研能力的需求。现与国内多家知名的技术服务企业进行科研合作与交流。在整个实验流程上,专家配合客户监测实验流程,审查实验数据(QC),以提高实验效率,并确保试验结果的专业性,科学性。流程包括实验设计支持、试验流程监控、实验数据审查、实验结果分析。
免疫组化
  免疫组化,是应用免疫学基本原理-抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)
标本及抗体
  实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片和冰冻切片,后者包括细胞爬片和细胞涂片。
实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体,单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是把纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血肿所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
实验步骤:
1.石蜡切片脱蜡至水
2.抗原修复后自然冷却
3.3%H2O2封闭内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3×3’。
4.组化笔画圈防止液体流走
5.BSA或血清封闭
6.加一抗4℃过夜,PBS洗
7.加酶标或荧光素标记二,然后PBS洗3×5’。
8.DAB显色(荧光不用显色)
9.苏木素或DAPI染细胞核
10.组化酒精脱水干燥二甲苯透明封片,荧光抗荧光淬灭封片剂封片
11.显微镜观察
  石蜡切片(paraffin section) 组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中,光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜下不易清楚区别出;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败,失去原有正常结构,因此,组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清晰辨认其形态结构。
染色
  活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺鐇反差,在一般光镜下不易清楚区别出;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败,失去原有正常结构,因此,组织要经固定 石蜡包埋 切片机染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清晰辨认其形态结构。
针对组织的不同及需要观察特异性,染色里面分很多种,下面,我们来看看一些常见的染色。
HE染色
  苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining),简称HE染色法,石蜡切片技术力常用的染色法之一。苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质内的染色质与细胞外基质的成分着红色。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研最基本、使用最广泛的技术方法。
Masson染色
  Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染)或绿色(被亮绿所染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。
如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染,肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。
I型、III型胶原呈绿色(GBM、TBM、系膜基质及肾间质呈绿色),嗜复红蛋白、肾小管胞质、红细胞呈红色。
苏丹3染色
  脂肪和苏丹染液有比较强的亲和力,苏丹3遇脂肪变橘黄色。(即萃取原理)苏丹Ⅲ是弱酸性染料,呈红色粉末状,易溶于脂肪和酒精(溶解度为0.15%)。苏丹Ⅲ是脂肪染色剂。适合用于生物脂肪材料的鉴定,可在光学显微镜下看到被染成橘黄色的小粒。苏丹是鉴别脂肪的染液,由NAOH CU(SO)4组成。
苏丹4染色
  深棕色粉末,无气味;在175℃时软化结块,在181~188℃熔融分解,260℃全部分解;1g溶于15ml氯仿,易溶于苯,溶于油、脂肪、石蜡油、苯酚,微溶于乙醇和丙酮,几乎不溶于水;在醇或苯中呈微紫红色溶液,醇溶液遇氢氧化钠显红紫色,硫酸中显蓝绿色,稀释则生成红色沉淀;最大吸收波长520(357)nm。生物染色剂,如油和脂肪染色,可将脂肪染成红色